![[생물학실험] 16SrDNA sequencing 을 위한 PCR product의 Vector Cloning-1](http://images.happyhaksul.com/thumb/191/190556-0001.gif)
![[생물학실험] 16SrDNA sequencing 을 위한 PCR product의 Vector Cloning-2](http://images.happyhaksul.com/thumb/191/190556-0002.gif)
![[생물학실험] 16SrDNA sequencing 을 위한 PCR product의 Vector Cloning-3](http://images.happyhaksul.com/thumb/191/190556-0003.gif)
![[생물학실험] 16SrDNA sequencing 을 위한 PCR product의 Vector Cloning-4](http://images.happyhaksul.com/thumb/191/190556-0004.gif)
![[생물학실험] 16SrDNA sequencing 을 위한 PCR product의 Vector Cloning-5](http://images.happyhaksul.com/thumb/191/190556-0005.gif)
![[생물학실험] 16SrDNA sequencing 을 위한 PCR product의 Vector Cloning-6](http://images.happyhaksul.com/thumb/191/190556-0006.gif)
분야
hwp♣ Introduction
♣ Materials & methods
♣ Results & Discussion
♣ Reference
우리가 CO에서 자라는 세균을 동정하기 위해 emrichment와 pure culture 를 시켜 얻은 샘플과 metagenome 샘플을 얻었었다. 이 중 우리조는 metagenome 샘플의 PCR를 통해서 CO 세균의 DNA를 확인할 수 있었다. 이렇게해서 얻은 16SeDNA의 sequencing을 위해 업체에 의뢰해야 하지만, 이 상태로 바로 데이터를 전송할 경우, 정확한 결과를 얻기 힘들다. 그 이유는 metagenome을 통해 얻은 DNA 로는 우리가 원하는 CO 환경에서 자라는 세균만을 포함하지 않을 수 있기 때문이다. 즉, 그 안에는 여러 종류의 세균이 있을 수 있음 을 염두에 두어야 한다. 따라서 우리는 16S rDNA의 염기서열 분석을 의뢰하기에 앞서 먼저 우리가 얻은 PCR product 에 대해 하나 하나 product 를 추출해야 한다. 이는 PCR 기법에서 잘 알려진 Vector cloning 으로 이루어진다.
♣ Materials & methods
< 얻은 유전자의 Vector에의 삽입 >
먼저 이때 쓰이는 Vector에 대해 먼저 알아보면, 기능은 다음과 같다.
① 세포 내에서 자가복제 (self-replication)를 함.
② 항생제를 이용한 선택 (selection) 이 가능
③ Multiple cloning site (MCS)를 이용할 수 있음.
④ Vector 부위를 이용한 DNA sequencing, 단백질 발현 등을 할 수 있음.
Vector의 종류
① plasmid
② bacteriophage
③ cosmid
ⓝ phagemid
※ Recombinant DNA
유전자 재조합 기술이란 DNA를 자르고 붙여서 새로운 DNA를 만든다는 말로 자르는 일 은 restriction enzyme이, 붙이는 일은 DNA ligase가 한다.
※ 제한효소 (restriction enzyme)
박상대, “분자생물학” -2판, 라이프사이언스
