분야
doc1. 실험 제목
2. 실험 날짜
3. 실험 목표
4. 준비물
5. 실험 과정
6. Discussion
[두 번째 실험- DELFIA, 임신 진단 키트]
1. 실험 제목
2. 실험 날짜
3. 실험 목표
4. 준비물
5. 실험 과정
6. 실험 결과
7. Discussion
[세 번째 실험-2nd Injection (Boosting)]
1. 실험 제목
2. 실험 날짜
3. 실험 목표
4. 준비물
5. 실험 과정
6. Discussion
[네 번째 실험- ELISA]
1. 실험 제목
2. 실험 날짜
3. 실험 목표
4. 준비물
5. 실험 과정
6. 실험 결과
7. Discussion
1. 실험 제목
1st Injection
2. 실험 날짜
2009년 4월 3일
3. 실험 목표
Mouse에 항원을 주입하여 항체를 만들 수 있다.
접종하는 위치와 Adjuvant의 유무에 따라 생성된 항체의 양을 비교할 수 있다
4. 준비물
Mouse: Balb/c, Male, 9 weeks old
Antigen: KLH(Keyhole Limpets Hemocyanin)
Adjuvant: FCA
PBS, 주사기, Mixer
Pipette, E-tube, 얼음
5. 실험 과정
① 각 쥐의 꼬리에 1번에서 4번까지 번호를 labeling한다
② 각 쥐에 접종할 항원을 다음과 같은 비율로 잘 섞어서 준비한다
mouse KLH(1mg/ml) PBS FCA Concentration
1 100㎕ 900㎕ - 100㎍/ml
2 100㎕ 900㎕ - 100㎍/ml
3 100㎕ 400㎕ 500㎕ 100㎍/ml
4 100㎕ 400㎕ 500㎕ 100㎍/ml
주의: Adjuvant를 섞을 때는 접종할 항원의 색깔이 고르게 흰색이 될 때까지 잘 섞어준다.
Adjuvant에는 결핵균이 섞여있으므로 조심해서 다룬다.
③ 각 쥐에 항원을 다음과 같은 경로로 접종한다..
mouse The amount of injection The amount of Antigen Route
1 200㎕ 20㎍ S.C.(겨드랑이피하)
2 200㎕ 20㎍ I.P. (복강)
3 200㎕ 20㎍ S.C.(겨드랑이피하)
4 200㎕ 20㎍ I.P. (복강)
주의: 복강에 주사할 때 장기를 찌르지 않도록 너무 깊이 접종하지 않도록 주의한다.
쥐를 잡을 때는 귀와 목 뒤쪽을 잘 감싸 잡아서 고개를 돌리지 못하도록 한다.
④ 쥐를 2주간 잘 키운다.
6. Discussion
What is tween20?
tween20은 맑고 약간 황색을 띄는 액체이다. 주성분은 polyoxyethylene sorbitol ester로 되어있다. 이온성이 아닌 계면활성제로 생화학적 응용분야에서 널리 쓰인다. 유화작용 및 세포막에서 막 단백질을 제거하여 세포막을 제거할 때 자주 이용된다. 성분의 소수성 정도에 따라 tween 20/40/60/80까지 존재하며 뒤의 숫자가 클수록 구성 성분의 탄소수가 많아져 소수성이 커지고, 유화작용을 더 잘 한다.
What is adjuvant?
그 자체로는 어떠한 항원항체반응을 가지지 않으면서 면역반응을 자극할 수 있고, 백신에 대한 반응을 증가시키는 물질이다. 그 어원은 '돕는다. 보조'라는 뜻을 가진 라틴어인 adjuvare에서 왔다. 면역학에서는 특정항원과 함께 사용했을 때 면역반응을 증거시키거나 가속화 시키는 역할을 하는 어떤 물질이라고 정의되어 있다. 알려진 종류는 oil, aluminum salts, virosomes이 있다. aluminum salts는 가장 잘 알려진 무기물질로 되어있는 adjuvant로 사람 백신에 흔하게 쓰인다. 유기물질로 되어있는 adjuvant는 주로 oil성분이며, 사람보다는 동물에게 주로 쓰인다. alum은 지난 20년간 많은 발전이 있었지만 국소적으로 염증이 생기는 부작용이 있다. 그런 부작용이 없는 adjuvant가 virosome이다 이것은 influenza virus의 hemaglutinin과 neuraminidase로 되어있다
