형질전환동물을 만드는 방법
분야
hwp2. 형질 전환 동물을 만드는 방법
1) Pronuclear injection (전핵 주입법)
2) Retroviral Vector
3) Sperm-mediated DNA transfer
4) SiRNA (small interference RNA)
5) 그 밖의 다른 방법
1. 형질 전환 동물이란?
- 형질 전환 동물이란 인위적으로 외래 유전자를 주입하여 본래의 유전형질이 변화되어진 동물을 말한다. 이러한 동물을 생산하기 위해서는 우수한 유전자들을 확보하고 이들을 효율적으로 발현시키기 위한 프로모터와 재조합시키는 유전자 재조합기술, 그리고 재조합된 유전자를 수정란의 핵에 미세주입하고 대리모에 이식하여 산자를 얻기 위한 수정란 조작기술이 요구된다.
2. 형질 전환 동물을 만드는 방법
1) Pronuclear injection (전핵 주입법)
- 1세포기 전핵에 DNA를 주입하거나 2세포기 수정란에 핵을 주입하는 방법이다.
(1) pronuclear injection (microinjection) 의 장점
- 유전자를 옮기는 가장 안전하고 신뢰성이 있는 방법이다.
- 종간에 변이에도 불구하고 종내에서의 효율이 일치한다.
- DNA 단편의 크기에 상관없이 유전자 주입이 가능하다.
- 종 특이성이 없다.
(2) pronuclear injection 의 단점
- 낮은 transgenic 효율을 보인다.
ex) 소의 경우 1600개를 주입해야 그 중 1개가 성공할 수 있다.
- 후기 발생시기에 gene에서 cell로의 도입이 어렵다.
- 기능성으로 작용해야하는 DNA가 나중에 재기능을 못할 경우도 있기 때문에 많은 수의 DNA 단편들이 삽입되어야 한다.
- 위치적으로 효과가 다르다.
- 형질 전환gene에 기원을 두기 때문에 질이 좋아야 한다.
(3) gene integration 의 기작
① 주입할 유전자를 선택한다.
② 재조합 유전자를 제조한다.
③ 1세포기 수정란의 채란을 하여야 한다.
④ 유전자를 1세포기 수정란의 전핵에 미세 주입한다.
⑤ 유전자 주입 수정란의 이식을 하여야 한다.
⑥ 생산 자축의 혈액분석 및 능력을 검정하는 과정을 거쳐야 한다.
※ ‘random collision theory’ (무작위 충돌 이론) 을 사용하여 염색체 상에 주입된 DNA에 박히도록 하는 방법을 쓴다.
