[생화학 실험] Brad for assay 와 BCA assay를 이용한 단백질 정량

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레포트 > 공학계열
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소개글

[생화학 실험] Brad for assay 와 BCA assay를 이용한 단백질 정량에 대한 자료입니다.

목 차
1. 실 험 제 목 : Brad for assay 와 BCA assay를 이용한 단백질 정량

2. 실 험 일 시 : 2010. 9. 27.

3. 서 론
1) Bradford Assay

2) BCA Assat

4. 실 험 목 적
5. 실 험 재 료

6. 실험 기기

7. 실험 방법

1)Brad for assay

2)BCA assay

8. 실험 결과

1)Bradford assay

①standard cuve
②미지시료

2) BCA assay
9.고찰

1)Bradford assay

2)BCA assay

본문내용

2) BCA Assat
현제 Bradford Assay와 함께 가장 많이 쓰이고 있는 단백질 정량방법이다. Lowry assay를 개량한 방법으로 Folin시약 대신 bicinchoninate(BCA)를 사용한다는 차이점이 있다. 단백질이 구리 이온Cu 2+, Cu 1+)을 환원 (Reduction) 시킬 수 있는 성질을 이용한다. 단백질에 의해 환원 된 구리 이온은 BCA용액과 반응을 해서, 보라빛의 화합물을 생성하게 된다. 이 화합물은 빛의 특정 영역(562nm)에서 구리 이온이 담긴 용액과 BCA용액 각각보다 빛의 흡수율이 높기에, spectrophotometer를 사용해서 측정하면 흡수율 차이를 측정할 수 있다. 단백질의 양이 많으면 보다 많은 보라빛 화합물이 생성되었을 것이다. 그리고 그 화합물은 빛을 더 많이 흡수하니까 흡수율이 증가하고, 그것에 비례해서 샘플 안에 있는 단백질 양을 측정 할 수 있다.

- 장점
① 일반적인 버퍼물질에 간섭을 덜 받는다
② 높은 온도에서 한다면 보다 민감하고 빠른 반응을 할수 있다
③ 계면활성제와 같이 사용할 수 있다.
④ 반응시약이 안정적이다.(최종 시료의 안정성)
⑤ 서로다른 단백질 사이에 반응의 차이가 거의 없다.
⑥ Lowry assay를 사용했을 때보다 방해를 주는 물질이 없다.

- 단점
① 반응 시간이 느린 편이다.
② 측정 후 단백질이 변질 될 수 있다.

4. 실 험 목 적 : 알고 있는 여러 가지 농도의 BSA용액을 만들어 흡광도를 측정하여 standard curve를 그리고 Brad for assay 와 BCA assay를 이용하여 미지 시료의 단백질을 정량해 본다.

#assay #Brad #BCA #단백질

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