Subject : DNA sub-cloning을 위해 원하는 유전자를 분리한다.
Purpose: DNA sub-cloning에 사용할 원하는 유전자를 만들기 위해 plasmid(vector)내에 restriction enzyme을 사용하여 DNA를 자르고 원하는 유전자를 삽입한 후, 목적하는 유전자가 정확하게 cloning되었는지 DNA 전기영동 결과를 분석하여 확인할 수 있
◆실험 첫째날 2011년 10월 24일 월요일
▶원리
1 Restriction enzyme 처리
- 이 실험에서 우리는 아무 처리되지 않은 plasmid와 foreign gene을 plasmid에 삽입하여 만든 inserted plasmid에 각각 제한효소를 처리하는 실험을 했다.
- 제한효소란 DNA의 특정한 염기서열을 인식하고 인식부위 또는 그 근처의 특정 이중사
제한효소에 의해 잘린 DNA들을 분리한다.
2. Principle
1) agarose gel electrophoresis 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
a. DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
b. Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.
c. DNA 형태에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA > linear DNA > open circular DNA
d. 전압
1. 정확한 위치에서의 DNA 절단: 염기서열에 특이적인 restriction endonucleases는 클로닝에 필수적인 분자 가위 역할을 한다
2. 자기 자신을 복제할 수 있는 작은 DNA 분자를 선택: 이러한 DNA를 cloning vector라고 한다. Vector는 운반체이며 전형적으로 플라스미드 또는 바이러스의 DNA가 있다.
3. 두 DNA 조각을 공유