DNA electrophoresis(agarose gel)
(1) 기본원리
DNA gel 전기영동 방법은 DNA를 크기에 따라서 분리하는 방법이다. DNA는 backbone의 phosphate group 때문에 전기영동에 사용되는 buffer에서 음전하를 띄고 있으며 두 전극 사이에 위치했을 때 양극 쪽으로 움직이게 되는 기본원리를 갖는다. 이때 DNA분자가 gel matrix사이를
1000ml을 원심 분리시킨 경우 pellet에 10ml 또는 그 이하의 배지를 붓고 resuspend시킴)
Cf. 대부분의 bacteria는 broth culture인 liquid medium에서 잘 생장한다. Liquid medium은 그 구성성분을 알 수 있는 defined medium(ex. M9)과 구성 성분을 알 수 없는 undefined medium(ex. LB)이 있는데 이번 실험에서는 LB배지를 사용하였다.
위해 선별 마커(selectable marker)를 이용한다. Selectable marker란 비형질전환체(non-transformant)가 가지고 있지 않은 새로운 특징을 형질전환된 세포에 제공하는 유전자를 말한다. 대부분의 플라스미드 클로닝 벡터는 숙주세포에 항생제 저항성을 제공하는 적어도 하나의 유전자를 가지고 있다.
그러나 항생제
유전자의 분리
a. Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들로는 DNA의 분자의 크기, Agarose의 농도, DNA 형태에 따라 이동속도가 다르다. 또 전압이 높을수록 전기장의 방향, Ethidium bromide, 전기영동 buffer의 성분과 이온의 강도도 전기영동 속도에 영향을 준다.
b. DNA loading buffer
Agatose gel의 well
DNA의 냉동보관 이유 : 효소는 -20℃, 50% glycerol이 들어있는 완충액 내에서 안정하게 존재한다. DNA를 상온에서 보관할 경우 DNA간 충돌에 의해 파괴될 수 있기 때문에 냉동보관 해야 한다.
- centrifuge의 원리 : centrifuge란 회전에 의한 원심력을 이용하여 성분이나 비중이 다른 물질을 분리시키는 장치를 말한