Method
unstarved plate에서 자란 worm을 1ml의 S media로 washing해서 모은다.(미리 비만억제처리/4마리씩)
S media로 2~3회 정도 washing 한다.(bacteria 제거)->600g 으로 centrifuge(먹이를 씻어줌)
S media에 30분 정도 담가두어(얼음에-선충이 계속 벽을타고 올라오는 것을 방지) 창자에 있는 bacteria
Method
M9 plate에서 worm을 S-media(1ml)로 모은 다음 2~3회 washing하고 30min동안 ice에서 bacteria가 모두 소화될 수 있도록 한다.(Bacteria 제거)
한번 더 washing해준다.
5000g에서 30s centrifuge한 후, worm만 남기고 S media는 제거해준다.
2X SDS buffer를 50㎕넣어주고 잘 섞일 수 있도록 pipeting한다
Method
1) Cell harvest
① 배지를 e-tube에 수거한다.
② PBS로 washing 하고 1ml PBS를 추가한다.
③ Scraper로 긁어 모아 e-tube에 담는다.
④ 5,000rpm/5min centrifugation
⑤ 상등액을 suction해서 pellet을 취한다.
2) Protein sampling
① Pellet에 lysis buffer를 넣는다.
② Voltexing하여 pellet을 살짝 풀어준 후 deep freezer (-80℃)에 1