용해시킨 후, 단백질을 추출하고 정량한다.
3. Method
1) Cell harvest
① 배지를 e-tube에 수거한다.
② PBS로 washing 하고 1ml PBS를 추가한다.
③ Scraper로 긁어 모아 e-tube에 담는다.
④ 5,000rpm/5min centrifugation
⑤ 상등액을 suction해서 pellet을 취한다.
2) Protein sampling
① Pellet에 lysis buffer를 넣는다.
② Voltexing
SDS, LiDS, DOC 등과 같은 cationic 및 anionic detergent로 다시 나뉘며 이들은 highly denaturant로 monomeric protein으로 단백질을 분리시키는 특성이 있어 Western blot analysis 및 분자량 측정 등에 주로 이용한다. 그리고 Triton X-100과 같은 non-ionic detergent는 less protein denaturant이기 때문에 protein-protein interaction등에 주로 이용된
1. 실험 목적
- 각자 채취한 혈액으로부터 DNA 추출 Kit를 사용하여 Genomic DNA를 추출한다.
- Spectrometer(Nano Drop)를 이용하여 추출된 DNA의 Optical Density를 측정하고 이로부터 DNA의 농도를 계산한다.
- DNA의 종류와 DNA 추출 방법을 알아본다.
- 흡광도 측정에 의한 DNA 농도 계산 및 순도측정의 원리를 알아본다.
추출물을 분리하는 단계인데 cell의 구성성분 중 필요 없는 부분을 부수어서 open시킨다. 그리고 세포 추출물로부터 DNA를 정제해야 하는데 이는 DNA를 제외한 RNA나 protein을 제거하는 과정이다. 마지막으로 남은 DNA sample을 농축하는 과정을 거친다. 4단계의 과정을 좀 더 자세히 알아보면 다음과 같다.
a. B
buffer에서 음전하를 띄고 있으며 두 전극 사이에 위치했을 때 양극 쪽으로 움직이게 되는 기본원리를 갖는다. 이때 DNA분자가 gel matrix사이를 통과하는 속도는 분자량이 커질수록 늦어지며 gel matrix가 치밀할수록(gel %가 높을수록)늦어지며, 또한 DNA분자량이 같더라도 구조에 따라서 움직이는 속도가 다르