바이러스학 실험 결과보고서 Cell harvest & Protein sampling
분야
hwp2. Objective
3. Method
1) Cell harvest
2) Protein sampling
4. Result
5. Discussion
1) SDS(sodium dodecy sulfate)
2) lysis buffer
3) Bradford 시약
6. References
2. Objective : 크기에 따라 단백질을 분리하는 SDS-PAGE를 하기위해서 poliovirus에 감염된 BGM cell을 용해시킨 후, 단백질을 추출하고 정량한다.
3. Method
1) Cell harvest
① 배지를 e-tube에 수거한다.
② PBS로 washing 하고 1ml PBS를 추가한다.
③ Scraper로 긁어 모아 e-tube에 담는다.
④ 5,000rpm/5min centrifugation
⑤ 상등액을 suction해서 pellet을 취한다.
2) Protein sampling
① Pellet에 lysis buffer를 넣는다.
② Voltexing하여 pellet을 살짝 풀어준 후 deep freezer (-80℃)에 15분간 넣어둔다.
③ 37℃ water bath에 살짝 녹인 후 centrifugation (13,000rpm, 15min, 4℃)
④ 상등액을 새로운 e-tube에 옮긴다.
⑤ O.D값을 측정한다.
(중략)
5. Discussion
이번 실험으로는 BGM cell을 sub cultre하고 seeding 한 후 virus를 감염시킨 BGM cell을 수거하여서 Cell harvest 후 Protein sampling을 통해 단백질을 추출하고 정량했다.
먼저 Cell harvest로 배지를 e-tube에 수거한다. PBS 1.5ml씩 넣어 washing 하고 1ml PBS를 추가한다. 배지의 단백질을 제거하기 위해 washing을 꼼꼼히 해준다.
(중략)
https://bio-chae.com/ripa-lysis-buffer/
Cell harvest & Protein sampling 실험은poliovirus에 감염된 BGM cell을 용해시킨 후, 단백질을 추출하고 정량하는 실험입니다. 단백질을 추출하는 이유는 SDS-PAGE를 해서 크기에 따라 단백질을 분리하기 위함입니다.
본문내용은 실험 목표, 실험 방법, 결과 사진, 실험과정에 대한 자세한 설명, 단백질의 양과 lysis,buffer 계산법과 SDS buffer, lysis buffer, Bradford 시약에 대한 설명과 원리 등을 포함하고 있습니다.
