1.실험목적
Osteopontin(OPN)단백질의 정량을 통해UV정량법을 알아보자.
2.이론
❀ 단백질이란
단백질은 아미노산(amino acid)이라고 하는 비교적 단순한 분자들이 연결되어 만들어진 복잡한 분자로, 대체적으로 분자량이 매우 큰 편이다. 단백질을 이루고 있는 아미노산에 는 약 20 종류가 있
Protein Quantity Method
◈ 단백질을 정량하는데 이용하는 spectroscopic 방법
à 단백질의 UV흡수에 따른 측정법
à Lowry assay
à Bradford dye assay
à the Smith copper/bicinchoninic assay(BCA assay)
☞ Lowry assay, Bradford assay, BCA assay는 단백질에 따른
색변화를 일으킨다.
Absorbance at 280nm(A280)
1. 정량 원리
법으로는 약 1~10mg의 단백질을 정량 할 수 있다.
미량뷰렛법: 흡광도를 이용하면 약 0.25~2.0mg까지 정량할 수 있도록 감도를 높일 수 있다. 시료에 CuSO₄또는 rochelle염과 CuSO₄를 가하여 540~560nm으로 흡광도를 측정하거나 CuSO₄와 NaOH혼액을 시료에 혼합하여 263nm,310nm의 흡광도를 측정하는 방법이다. 착화합
2. 실험이론
1)단백질단백질 구조
-단백질은 구성물질인 아미노산이 펩티드 결합(아미노산의 아미노기[-NH기]와 다른 아미노산의 카르복실기[-COOH기]가 연결되어 있음)으로 연결되어 있으며, 매우 큰 분자이기 때문에 때때로 거대분자 펩티드라고도 한다. 아미노산은 여러 가지 구조식을 가지고 있
UV,VIS 분석법에 사용되는 기기
분광광도계(Spectrophotometer) :
투광도를 두 가지 복사선의 세기 비로 나타내는 흡수분광법 기기.
- 일반적인 정량과정
원칙적으로 정량하고자 하는 물질의 최대 흡수파장()과 몰 흡수율()을 정확히 알고 있으며, 다른 물질에 의한 간섭이 없고, Lambert-Beer의 법칙을 엄밀히