1.실험목적
Osteopontin(OPN)단백질의 정량을 통해 UV정량법을 알아보자.
2.이론
❀ 단백질이란
단백질은 아미노산(amino acid)이라고 하는 비교적 단순한 분자들이 연결되어 만들어진 복잡한 분자로, 대체적으로 분자량이 매우 큰 편이다. 단백질을 이루고 있는 아미노산에 는 약 20 종류가 있
test tube에 시료와 증류수 reagent C를 넣고 10분간 방치한다.
② 위 test tube에 reagent D 0.5ml을 신속히 가하여 잘 흔든다음 실온에서 10분간 방치한후 600nm에서 흡광도를 측정한다
③ blank의 단백질 함량을 계산한다
④ Std. albumin solution의 흡광도를 기준으로 표준곡선을 그린다음 흡광도로 농도를 환산한다.
방법이다. Folin 시약(Lowry 방법)과 BCA시약은 발색반응을 위해 cupric ion에서 cupurous ion으로 환원반응이 일어 나야 한다. 이들시약은 단백질 양에 비례하여 형성된 cupurousion과 단백질의 복합체를 형성하고 그 발색정도가 단백질농도에 비례하여 정량이 가능하다. 이들 구리이온의 화학변화에 영향을 주는
단백질의 경우 단백질의 농도가 1mg/ml이고 자외선이 통과하는 경로가 1cm일 때 280nm에서의 흡광도는 1.0이다. 따라서 대부분의 순수한 단백질의 농도는 280nm에서의 흡광도를 측정함으로써 신속히 결정할 수 있다. 이 방법은 정량하는 데 시간이 적게 들 뿐만 아니라 정량하고 난 후의 단백질을 완전히 회수
Reagent A
* 0.1M NaOH에서의 2% Na2CO3(4˚C에서 보관)
* 단백질정량법 중 Lowry 방법과 BCA방법에 쓰임
단백질정량법의 종류
* 분광학적 방법
* Bradford 방법
* Lowry 방법
* 뷰렛 방법
* BCA 방법
1) 분광학적 방법
내용
* 정확히 비색법은 아님
* 보통 단백질의 경우 페닐알라닌, 트립토판,
티로신의