DNA를 응축시킬 수 있다. 그러나 totall cell DNA 분리와 plasmid정제와는 중요한 차이점이 있다. 플라스미드 분리는 일반적으로 많은 양의 chromosomal DNA 로부터 분리하여야 한다. 플라스미드 분리방법은 플라스미드DNA와 bacterial DNA의 물리적인 차이점에 의해 분리된다. 가장 큰 플라스미드의 길이는 E. coli 의
DNA를 정제해야 하는데 이는 DNA를 제외한 RNA나 protein을 제거하는 과정이다. 마지막으로 남은 DNA sample을 농축하는 과정을 거친다. 4단계의 과정을 좀 더 자세히 알아보면 다음과 같다.
a. Bacterial cell 배양물의 증식 및 수확
37℃, LB 배지, 200 rpm shaking incubator에서 E. coli의 doubling time은 20분이고, maximum densi
ampicillin을 통해서 제대로 target gene이 삽입되었는지를 관찰하는 것이다
▣실험1 [Digestion of DNA with Restriction Enzyme]
실험준비물 :
Materials-restriction enzymes (ndeⅠ,BamhⅠ), restriction enzyme reaction buffer, DDW
Equipments-water bath, brief centrifuge
Procedure :
① e-tube를 두 개 준비하여, 각각 plasmid only와 inserted plasmid를 5
DNA를 만들고 이를 E.coli에 transformation 시키는 과정을 수행하게 되었다.
DNA를 재조합하여 cloning하는 과정은 다음과 같다. 우선 vector가 되는 plasmidDNA를 chromosomal DNA와 분리한 뒤 제한효소로 처리하여 접착성 말단을 갖는 DNA단편을 만든다. 다음에 다른 생물로부터 DNA를 분리, 정제하여 plasmidDNA에 사용
◎분리의종류
1.밀도차에 의한 혼합물의 분리
*분리의 원리
서로 섞이지 않는 두 액체의 밀도가 다른 경우에는 그 차를 이용하여 액체 혼합물을 분리할 수 있다.
(1) 두 액체 혼합물을 시험관에 넣고 가만히 두면 밀도의 차 때문에 밀도가 큰 액체는 아래
층, 밀도가 작은 액체는 위층을 이루게 되