Transformation의 원리
E.coli는 linear 또는 circular DNA를 받아들일 수 있는데, 이러한 과정을 transformation이라 하며 다음과 같은 단계를 거쳐 이루어진다. E.coli cell이 DNA를 uptake 할 수 있는 상태(competent)로 만들어 주기위해 E.coli cell을 Ca과 같은 multivalent ion의 존재 하에 0℃에서 incubation한다. 이때, cation은 E.coli cel
multivalent ions of organic solvents, 및 detergent 순도등에 의해 좌우된다. 그리고 특성에 따라 detergent는 ionic detergent, non-ionic detergent, 및 zwitterionic detergent로 나눌 수 있다. Ionic detergent는 SDS, LiDS, DOC 등과 같은 cationic 및 anionic detergent로 다시 나뉘며 이들은 highly denaturant로 monomeric protein으로 단백질을 분리시키는 특
◎ Reporter Gene
형질전환을 한 후 실험자가 쉽게 자신의 형질전환체를 확인할 수 있게끔 만들어 주는 유전자를 말한다. Reporter Gene 사용하는 목적은 우선 형질전환된 유전자가 발현되었는지의 유무와 두 번째로 어느 정도의 양으로 발현되었는가 알아보기 위한 것이다. Reporter Gene으로 사용되는 것들은 G
light chains: 40 V x 5 J = 200
light chains: 30 V x 4 J = 120
H chains: 40 VH x 27 DH x 6JH = 6,480
320 L chains x 6,480 H chains = 2.1 x 106
Junctional diversity (addition or deletion of nucleotides at recombination sites, especially of H chain), estimated to add 3x107 fold to overall diversity.
Recombination signals
Rag-1/Rag-2/Artemis
Experiment 1:
DNA sub-cloning
Purpose
Day 1:
DNA sub-cloning의 1단계: 원하는 유전자를 분리한다.
유전자를 복제하기 위해서는 우선 bacterial cell로부터 DNA를 분리해내고, 그로부터 원하는 유전자를 잘라내야 한다. 이와 같이 이 실험에서는 DNA sub-cloning의 첫 단계로서 원하는 유전자를 분리해내는 단계를 수행