소개글
[생화학] Telomere 쇼트닝과 Oxidative Stress가 STAT5a에 미치는 영향에 대한 자료입니다.
목차
1.Introduction
2.Overview
3.Backround Knowledges
4.GM-CSF pathway
5.Telomere shortening in MØ
6.GM-CSF dependent proliferation is impaired in Aged MØ
7.Which component of Signaling Pathway by GM-CSF is impaired?
8.GM-CSF dependent proliferation is affected by Telomere length
9. Short Telomere causes reduced phosphorylation of STAT5a
10.Short telomere causes enhanced oxidative stress
11.Result
12.Discussion
본문내용
G1 Terc -/- mouse & G3 Terc -/- mouse
- G1은 1세대(1st generation), G3은 3세대(3rd generation)을 의미한다. 각각 Terc(Telomerase RNA compartment) gene이 knoukout 된 1세대 & 3세대에 해당하는 mouse이다.
- Telomerase 활성이 매우 낮으며, Telomere 길이는 G1이 G3보다 길다.
- G1 Terc -/- mouse derived MØ는 Young mouse derived MQ와 특성이 유사하고, G3 Terc -/- mouse derived MØ는 Aged mouse derived MQ와 특성이 유사하여 본 실험에서 Control로 사용되었다.
GM-CSF signaling pathway
- 본 실험과 관련된 GM-CSF pathway는 GPCR-ERK를 경유하는 pathway와 JAK2-STAT5a를 거치는 pathway 의 2가지가 있음
STAT5a는 핵 외부에서는 monomer로 존재
Ligand가 결합한 JAK에 의해 인산화되면 핵으로 이동하여 dimer를 형성한 후 Transcription factor로서 작용함
STAT5a는 STAT5b와 동일한 DNA 서열에 결합하며, 서로 96%의 homology를 보임
mRNA 발현량을 실시간으로 비교할 수 있는 기법. 본 실험에서는 STAT5a의 mRNA 발현량을 비교할 목적으로 사용되었음
Step 1. mRNA extraction 기법을 통해 total mRNA를 정제한다.
Step 2. total mRNA에 poly dT와 mRNA 특이적인 primer를 주입하여 RT-PCR을 수행한다.
Step 3. RT-PCR로 형성된 ds cDNA에 대해 Realtime PCR을 수행한다.