분야
pptx2.Material & Method
3.Result& Discussion
Trypan blue exclusion
MTT assay
In vivo 몸무게 변화
조직분석 경과
4.Reference
배양접시의 배지 제거 후 PBS로 두 번 세척
Trypsin-EDTA 0.5ml을 가하여 37℃에서 3~5분간 incubation한 후 세포를 톡톡 떼어냄
DMEM 2ml을 가하여 Trypsin-EDTA 작용을 중지시킨 후, 떼어낸 세포를 15ml tube에 옮김
상온, 2000 rpm에서 5분간 원심분리
배양액 제거하고 세포에 1ml DMEM을 가하여 골고루 re-suspending하여 세포부유액 준비
쥐의 꼬리에 마킹 ( 식염수 x, 50% alcohol 1줄, 25% alcohol 2줄 12.5% alcohol 3줄)
쥐 각각 전자저울로 몸무게 측정 후 기록
쥐를 한 마리씩 Zonde 위에 올려놓고 오른손으로 꼬리를, 왼손으로 가죽과 머리부분을 잡아 주사기로 식도를 찾아 밀어 넣은 후 300㎕/㎏ 경구투여
1줄 50%, 2줄 25%, 3줄 12.5% alcohol 투여하고 마킹 없으면 식염수 경구투여
4) 경구투여가 끝나면 Cage에 다시 넣어 상태 관찰 후 방치
위와 같은 방법을 4일 반복
조직을 먼저 100mg을 잰다.
조직파쇄기에 1을 넣고 3ml의 buffer를 첨가하여 파쇄한다.
15ml conical tube에 넣고 원심분리한다.
상등액만 따서 0.5ml metaphosphoric acid를 가하여 침전시켜 20초 동안 voltex한다.
10000rpm에서 10분간 원심분리한다.
상등액만 따서 0.45μm사이즈의 필터로 필터링한다.
200μl를 LC용 주사기로 취하여 주입한다.
HPLC로 GSH 함량을 분석한다.
Media의 역할
-> 세포손상억제
Trypsin (비선택적 단백질분해효소)
Media(FBS) -> Trypsin inhibitor로 작용
Trypsin 활성억제-> 세포손상억제
