![[생화학] SDS-PAGE 단백질 분리 실험-1](http://images.happyhaksul.com/thumb/558/557930-0001.gif)
![[생화학] SDS-PAGE 단백질 분리 실험-2](http://images.happyhaksul.com/thumb/558/557930-0002.gif)
![[생화학] SDS-PAGE 단백질 분리 실험-3](http://images.happyhaksul.com/thumb/558/557930-0003.gif)
![[생화학] SDS-PAGE 단백질 분리 실험-4](http://images.happyhaksul.com/thumb/558/557930-0004.gif)
![[생화학] SDS-PAGE 단백질 분리 실험-5](http://images.happyhaksul.com/thumb/558/557930-0005.gif)
![[생화학] SDS-PAGE 단백질 분리 실험-6](http://images.happyhaksul.com/thumb/558/557930-0006.gif)
분야
hwp1) SDS-PAGE에서 단백질이 분리되는 원리
2) SDS
3) Stacking gel과 running gel의 역할
4) Disulfide bond를 끊어주는 reducing agent
Material&Reagents
Western Blot
Blocking
Protocol
결과
SDS-PAGE, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis는 생화학과 유전학 및 분자 생물학에 이용되는 단백질 분리 기술로, 그들의 전기 영동 이동성(polypeptide chain의 길이 또는 분자량 뿐만 아니라 Protein folding, Posttranslational modification과 다른 인자들에 의한)을 이용한 기술이다.
1) SDS-PAGE에서 단백질이 분리되는 원리
처음 단백질의 solution은 SDS를 첨가한 후에 분석된다. 이 음이온화 detergent는 2차 구조와 non-disulfide bond에 의한 4차 구조를 denature 시킨다. 또한 단백질의 질량에 따라 일정 비율로 각 단백질을 – charge를 띠게 한다.
SDS가 없이는 분자량이 비슷한 다른 단백질들이 protein folding의 차이로 인해서 다르게 이동하는데, folding 방식의 차이에 따라 어떤 단백질들은 겔에서 다른 단백질보다 크기가 더 잘 맞아서 빠르게 이동할 수도 있다. SDS를 첨가함으로 이러한 문제점들을 해결하고 선형으로 단백질을 만들어 분자량(일차구조 또는 아미노산 수)의 크기에 따라 분리할 수 있게 된다. SDS가 단백질에 붙는 비율은 대략 1.4g SDS에 1.0g 단백질이다. 물론 그 범위는 1.1-2.2g SDS/g protein의 비율로 나타날 수 있다. 이 비율은 대략 전체 질량에 비례한다. 대부분 단백질은 이에 따라 오직 단백질의 사이즈만 겔 내 이동거리와 관련되어 겔 속을 움직이게 된다. Tracking dye가 단백질 solution에 첨가되어 실험에서 전기영동 시에 단백질의 이동을 구분할 수 있게 된다.
