[생물학실험] Bradford Assay
![[생물학실험] Bradford Assay-1](http://images.happyhaksul.com/thumb/93/92698-0001.gif)
![[생물학실험] Bradford Assay-2](http://images.happyhaksul.com/thumb/93/92698-0002.gif)
![[생물학실험] Bradford Assay-3](http://images.happyhaksul.com/thumb/93/92698-0003.gif)
분야
hwp2. Introduction
3. Materials
4. Method
5. Result
6. Discussion
7. Reference
2. Introduction
산성용액에서 coomassiebrilliant blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대흡광도(λmax)는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하므로 정량이 가능하게 된다. 이 방법은 발색 반응이 2분 이내에 완결 되며, 1시간까지 안정성이 유지된다.
Bradford 방법의 감도는 Lowry 방법보다 좋으며, 미량 정량 (microassay)을 사용하면 ~20mg의 단백질량을 측정할 수 있다. Bradford 방법은 빠를 뿐만 아니라 비단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없다. 정에 방해성분으로 알려진 것으로는Triton X -100과 황산도데실나트륨(SDS)이 있다.
시약
-Serva Blue G dye: CoomassieBrilliant Blue G-250 dye, phosphoric acid, methanol의
혼합된 용액을 구입하여 사용한다. 사용 전에 이 염료 시약을 증류수로 5배 희석하여
여과한 후 유리용기에 담아 실온에서 보관한다. 이 희석 용액은 2주간 안정하다.
-1mg/ml bovine serum albumin(BSA)
-95% ethanol
-85% 인산 또는 미리 혼합된 Bio-Rad kit
4. Method
1. Bradford Reagent를 병 안에서 천천히 섞고 상온에 가져온다..
2. Protein standards(BSA)를 측정하려고 하는 sample과 같은 buffer로 일정하게 희석하여 준비한다. Protein standards의 범위는 1㎍/ml 씩으로 한다.
☛ http://kin.naver.com/
☛ http://www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/minibradford.htm
