SDS-PAGE arylamide와 bisacrylamide의 3차원적인 구조로인해 사이사이에 공간을 형성하여 그 사이로 단백질이 지나가면서 분류되는 방법인데, 두종류로 Stacking gel에서는 전압을 걸어주어 단백질의 PI를 이용해 net charge에 전위차가 생겨 단백질 이끌려 가면서 분류되는 방법이다. running gel은 단백질을 염색하고
SDS-PAG
SDS-PAGE, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis는 생화학과 유전학 및 분자 생물학에 이용되는 단백질 분리 기술로, 그들의 전기 영동 이동성(polypeptide chain의 길이 또는 분자량 뿐만 아니라 Protein folding, Posttranslational modification과 다른 인자들에 의한)을 이용한 기술이다.
1) SDS-PAGE에서 단백
다. Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한
2. Method
[실험재료]
premix, template & primer, D.W, mineral oil, thermocycler(PCR기계), Seakem LE agarose, gel caster, 1×TAE, EtBr, 마이크로피펫, 1.5㎖ tube
[실험방법]
① premix가 들어있는 20㎕ tube에 template DNA 1㎕, primer 2㎕를 D.W 17㎕를 넣고 잘 섞기 위해 vortexing 해준다.
② 적당하게 centrifuge 해준다.
- vortexing 시에 위로