SDS-PAG
SDS-PAGE, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis는 생화학과 유전학 및 분자 생물학에 이용되는 단백질분리 기술로, 그들의 전기 영동 이동성(polypeptide chain의 길이 또는 분자량 뿐만 아니라 Protein folding, Posttranslational modification과 다른 인자들에 의한)을 이용한 기술이다.
1) SDS-PAGE에서 단백
왜 단백질을 분리하여만 하는가?
단백질분리는 proteomics, drug 발견과 생산에 매우 중요한 일이다.
이런 모든 분야에서 반드시 sample preparation, protein identification, characterization, purification등이 포함된다.
Proteomics나 혹은 발현된 단백질의 기능 연구하는 경우에 단백질분리는 필수적이다.
“Workhorse of prote
1. Title : Cell harvest & Protein sampling
2. Objective : 크기에 따라 단백질을 분리하는 SDS-PAGE를 하기위해서 poliovirus에 감염된 BGM cell을 용해시킨 후, 단백질을 추출하고 정량한다.
3. Method
1) Cell harvest
① 배지를 e-tube에 수거한다.
② PBS로 washing 하고 1ml PBS를 추가한다.
③ Scraper로 긁어 모아 e-tube에 담는
단백질 혼합물이 100℃ 내외에서 SDS와 함께 가열되면 SDS가 polypeptide backbone을 둘러싸게 되어 negative charge를 부여한다. 이를 통해 각각의 polypeptide는 charge가 negative하게 통일되고, 이로 인해 electrophoresis동안 단백질이 charge에 관계없이 크기에 의해 분리될 수 있게 한다.
3) PRO-PREPTM Protein Ex
평판(slab)에서 동시에 여러 시료와 표준 물질을 분석 할 수 있는 기법.
Gel의 세공 크기를 조절하여 하전된 물질의 이동속도 결정.
대표적 Gel 물질: Agarose & Polyacrylamide.
Polyacrylamide 농도:3~20% 가능
단백질은 SDS와 polyacrylamide 전기영동(SDS-PAGE)→ 분자량에 따른 분리
PCR 산물의 확인
정제