2) BCA Assat
현제 Bradford Assay와 함께 가장 많이 쓰이고 있는 단백질 정량방법이다. Lowry assay를 개량한 방법으로 Folin시약 대신 bicinchoninate(BCA)를 사용한다는 차이점이 있다. 단백질이 구리 이온Cu 2+, Cu 1+)을 환원 (Reduction) 시킬 수 있는 성질을 이용한다. 단백질에 의해 환원 된 구리 이온은 BCA용액과 반응
Reagent A
* 0.1M NaOH에서의 2% Na2CO3(4˚C에서 보관)
* 단백질 정량법 중 Lowry 방법과 BCA방법에 쓰임
단백질 정량법의 종류
* 분광학적 방법
* Bradford 방법
* Lowry 방법
* 뷰렛 방법
* BCA 방법
1) 분광학적 방법
내용
* 정확히 비색법은 아님
* 보통 단백질의 경우 페닐알라닌, 트립토판,
티로신의
Protein Quantity Method
◈ 단백질을 정량하는데 이용하는 spectroscopic 방법
à 단백질의 UV흡수에 따른 측정법
à Lowry assay
à Bradford dye assay
à the Smith copper/bicinchoninic assay(BCA assay)
☞ Lowry assay, Bradford assay, BCA assay는 단백질에 따른
색변화를 일으킨다.
Absorbance at 280nm(A280)
1. 정량 원리
등이 있다.
2. 단백질 정량법이란 무엇인가?
단백질 농도를 정량하는 방법에는 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등이 있다. 각각의 감도, 간편함, 단백질의 종류에 의한 감도의 차이, 방해물질의 종류와 허용농도 및 반응액의 PH등에 차이가 있으므로 측정한 대상에 따라 적당한 방법을 선택하여야 한다.
BCA시약은 발색반응을 위해 cupric ion에서 cupurous ion으로 환원반응이 일어 나야 한다. 이들시약은 단백질 양에 비례하여 형성된 cupurousion과 단백질의 복합체를 형성하고 그 발색정도가 단백질 농도에 비례하여 정량이 가능하다. 이들 구리이온의 화학변화에 영향을 주는 화합물이 검체에 존재할 경우 단백