1R-1. 올바른 micropippette 사용법에 대해서 설명하라.
-micropippette의 기본적인 설명
: micropippette의 용량의 단위는 microliter 이다. 용량은 micropippette 손잡이에 붙어있는 라벨로 알 수 있다.
그림 일반적으로 많이 사용하는 네 가지
종류의 micropippette
사진에서 왼쪽으로부터 1000 microliter (이것만 파란색
갖는 아가로스겔(agarose gel)이나 폴리아크릴아마이드겔(polyacrylamide gel)을 사용한다. 이러한 지지체 내에서 작은 물질은 빠르게, 큰 물질은 느리게 이동하므로 분자량에 따라 시료를 분리할 수 있다. 또한 시료의 이동거리와 분자량은 거의 반비례하므로 전기영동을 이용하여 분자량을 결정할 수 있다.
2. Method
[실험재료]
premix, template & primer, D.W, mineral oil, thermocycler(PCR기계), Seakem LE agarose, gel caster, 1×TAE, EtBr, 마이크로피펫, 1.5㎖ tube
[실험방법]
① premix가 들어있는 20㎕ tube에 template DNA 1㎕, primer 2㎕를 D.W 17㎕를 넣고 잘 섞기 위해 vortexing 해준다.
② 적당하게 centrifuge 해준다.
- vortexing 시에 위로
전기가 흐르고 있다. 그리고 그물 망 구조를 가지고 있는 agarose gel이 있다. 그래서 well에 DNA를 loading하게 되면 크기와 무게, 모양에 따라서 많이 이동할 수도, 적게 이동할 수 있다. 이 차이를 가지고 어느 band가 어떤 물질을 가지고 있는지를 확인할 수 있다.
① Agarose gel전기영동 시 DNA의 이동에 영향을