Transformation이라는 현상은 플라스미드 vector를 E.coli cell에 도입하고 발현할 수 있게 한다. 그러나 DNA clonning에서 유용하게 쓰이기 위해서 플라스미드는 특정 항생제에 대한 내성을 포함하고 있어야 한다. 예를 들어 ampicillin-resistance gene은 β-lactamase를 encode하는데, 이 효소는 암피실린을 inactivate한다. 플라
유전자클로닝의 개요
DNA는 많은 생명공학 기술에 사용되고 있죠? 과학이 발달한 요즘은 DNA를 손쉽게 추출할 수 있습니다. 그러나 추출할 수 있는 DNA는 매우 적은양이기 때문에 다음의 기술을 이용하여 원하는 양 만큼의 DNA를 얻을 수 있습니다.
유전자 클로닝
우리가 원하는 DNA를 대량으로 얻기 위해
E. coli의 doubling time은 20분이고, maximum density인 약 2~3 X 109 cells/ml 에 도달할 때까지 분열한다. 배양물의 증식 정도는 OD값 측정(600nm)으로 알 수 있다. 적당히 증식된 세포를 centrifuge tube로 옮기고 원심분리 시킨 후, 상층액을 버리고 pellet을 작은 부피로 resuspend시킨다. (배양액 1000ml을 원심 분리시킨 경우 pell
플라스미드를 uptake한 세포를 구별해야 할 필요가 있다. 이를 위해 선별 마커(selectable marker)를 이용한다. Selectable marker란 비형질전환체(non-transformant)가 가지고 있지 않은 새로운 특징을 형질전환된 세포에 제공하는 유전자를 말한다. 대부분의 플라스미드클로닝 벡터는 숙주세포에 항생제 저항성을 제
플라스미드나 박테리오파지처럼 독자적 복제능력이 있는 적당한 유전인자 운반체(vector)에 연결시켜 주는 일이다. DNA 단편은 자기복제 능력이 없으므로 이것들이 새 숙주 세포에 들어가서 유전자로서 기능을 할 수 있게 하기 위해서 작은 레플리콘에 연결시켜 그 숙주세포에서 자기복제 할 수 있게 해