transformant를 multiplication
◈ Purpose
전날 만든 transformant가 제대로 배양되었는지 colony를 확인하고, ampicillin을 처리해서 원하는 gene이 제대로 inserted된 것인지 아니면 self-ligated plasmid인지 확인한다.
◈ Principle
형질전환된 세포의 선별
예를 들어 1ng의 pUC8으로 1,000~10,000 형질전환체(transformant)가 생길 수
1. Cloning의 정의
․ Clone ; identical하다.
ex) Cell clone은 identical한 cell의 집합
Bacterial clone은 같은 형질의 세균들 집합
Human clone은 복제인간
Gene clone은 동일한 유전자의 집합
위의 그림에서와 같이 한 cell에서 배양하여 가득 채운 cell들은 모두 identical하다는 전제하에 실험을 하게 된
Transformation
항생제와 LacZ를 이용한 selection
4.올바른 clone을 선택한다
Plasmid DNA 분리
Restriction enzyme mapping
DNA sequencing
Gene cloning의 결과
1.원하는 유전자를 얻어낸다
유전자는 mRNA에서 얻을 수도 DNA에서 얻을 수도 있다. 이때 RNA는 각 장기마다 발현하는 정도가 다르므로 반드시 내가 원하는 유전자
Transformation이라는 현상은 플라스미드 vector를 E.coli cell에 도입하고 발현할 수 있게 한다. 그러나 DNA clonning에서 유용하게 쓰이기 위해서 플라스미드는 특정 항생제에 대한 내성을 포함하고 있어야 한다. 예를 들어 ampicillin-resistance gene은 β-lactamase를 encode하는데, 이 효소는 암피실린을 inactivate한다. 플라
Introduction:
여러 질병의 현상을 통합적으로 설명할 수 있다면치료하는데 있어서 유익한 결과를 가져올 것이다.
흡연, 고혈압, 당뇨, 비만인 사람들에게서 TGF-β수치가 증가함
Objective: 여러 질병들에 대한 TGF-β의 신호전달에 대한 역할에 대하여 알아보고자 함
TGF-β는 조직의 섬유화, 상처, 흡연,