[반응공학실험] Bradford 분석법에 의한 미지 단백질 시료의 정량
![[반응공학실험] Bradford 분석법에 의한 미지 단백질 시료의 정량-1](http://images.happyhaksul.com/thumb/157/156290-0001.gif)
![[반응공학실험] Bradford 분석법에 의한 미지 단백질 시료의 정량-2](http://images.happyhaksul.com/thumb/157/156290-0002.gif)
![[반응공학실험] Bradford 분석법에 의한 미지 단백질 시료의 정량-3](http://images.happyhaksul.com/thumb/157/156290-0003.gif)
![[반응공학실험] Bradford 분석법에 의한 미지 단백질 시료의 정량-4](http://images.happyhaksul.com/thumb/157/156290-0004.gif)
분야
hwp•Principle
•Material
•Process
•Result
•Consideration
-Biochemical Engineering Lab
•Purpose
최근 인간 게놈프로젝트 이후 신기능 단백질 제품의 수요 확대와 더불어 생물 산업분야에서 유전자 조작을 통한 재조합 단백질 의약품은 높은 부가가치와 큰 시장 규모로 발전하고 있다. 단백질 의약품의 생산 분야에서 국제 경쟁력을 가지기 위해서는 목적 단백질의 높은 생산성을 갖는 배양공정의 개발이 중요한 부분을 차지한다. 이러한 배양공정의 개발을 위해서 배양액으로부터 단백질의 정제와 정량 분석은 필수적인 부분이다. 단백질 정량에 있어서 중량측정이 가장 정확한 정량법이지만 시료중의 불순물 제거조작에서 손실이 많을 뿐만 아니라 장시간이 걸린다는 단점이 있다. 따라서 신속하고 고감도를 갖는 단백질 정량법은 높은 단백질 생산성을 위한 최적화 공정에 중요한 요소로 작용한다.
•Principle
단백질의 빠른 정량을 위해서 일반적으로 사용되는 방법은 흡수분광법이다. 흡수분광법은 분자의 구조와 환경에 의해 광의 파장과 능률이 정해지는 성질을 이용한다. 강도 I0의 광이 두께 d cm에서 몰농도 c (mol/L)의 물질을 통과해 나오는 광의 강도 I는 다음의 Lambert-Beer's의 법칙을 따른다.
여기에서 ε는 몰흡광계수이다. 실제로 Beer의 법칙은 높은 농도(보통>0.01 mol/L)의 시료에서는 시료용액에 존재하는 각 입자들이 이웃한 입자의 전하 분포에 영향을 주므로 해서 흡수화학종 입자 사이에 평균거리가 줄어든다. 이러한 상호작용은 복사선의 일정 파장을 흡수하는 입자의 능력을 변화시켜서 홉광도와 농도사이의 직선관계를 벗어나게 한다. 따라서 Beer의 법칙이 잘 들어맞는 적절한 농도범위의 기준용액을 만들어서 미지 시료의 농도를 분석할 수 있다. 이러한 흡수분광법에 의한 단백질 정량에 사용되는 광의 파장은 자외선영역과 가시광선영역으로 나뉜다. 자외선영역에서의 흡수 분광법은 단백질에 포함되어있는 tryptophan, tyrosine, phenylalanine이 갖는 흡수를 280nm에서 정량하는 방법이다.
