분야
doc▣ Experiment:
▣ Experimental Objective: 쥐의 피하와 복강에 antigen, antigen+adjuvant 주사하여 항체를 생성 시킨다.
▣ Preparation:
▣ Principle
▣ Procedure
▣ Result & Discussion
▣ Date: 2009년 4월 10일
▣ Experiment 1 :
▣ Experimental Objective: 알고 있는 농도의 TNF-α를 이용하여 standard curve를 그리고 농도를 모르는 Sample에 TNF-α가 얼마나 들어있는지 측정한다.
▣ Preparation:
▣ Principle
▣ Procedure
▣ Result
▣ Discussion
▣ Experiment 2:
▣ Experimental Objective: 임산부와 일반 남성의 소변을 통해 임신 진단 키트의 임신 진단 원리를 알아보기
▣ Preparation:
▣ Principle
▣ Procedure
▣ Result & Discussion
▣ Date : 2009년 4월17일
▣ Experiment :
▣ Experimental Objective: 기억면역을 이용하여 같은 antigen을 두번째 injection하여 면역반응을 촉진시켜 항체가 많이 생성되도록 한다.
▣ Preparation :
▣ Priciple :
▣ Procedure
▣ Result & Discussion
▣ Date: 2009년 4월 24일
▣ Experiment :
▣ Experimental Objective: ELISA를 통해서 mouse 혈액의 KLH에 대한 항체의 농도를 측정
▣ Preparation:
▣ Priciple :
▣ Procedure
▣ Result & Discussion
▣ Date: 2009년 4월 28일
▣ Experiment :
▣ Experimental Objective:
▣ Preparation :
▣ Procedure
▣ Result & Discussion
▣ Experiment:
▣ Experimental Objective: 쥐의 피하와 복강에 antigen, antigen+adjuvant 주사하여 항체를 생성 시킨다.
▣ Preparation:
1. Mouse: Bal b/c, Male, 9week
2. Antigen: KLH (Keyhole Limpets Hemooganin)
→ 분자량이 큰 glycolprotein(면역 원성이 매우 높아 항체 생성을 잘한다.)
3. Adjuvant: FCA (Focal cerebral atrophy)
→Heating한 결핵균이 포함되어 있다.
4. Apparatus: pipettes, injector, syringe mixer, latex glove, ice box
▣ Principle
체액성 면역: 골수에서 성숙한 B림프구가 항체를 만들어 체액으로 방출하여 항원을 제거하는 작용
1st injection: 항원이 1차 침입하여 기억세포와 항체를 생산하는 반응
2nd injection(Boosting): 같은 항원이 재차 침입하였을 경우 기억세포의 도움으로 기억세포와 항체를 빠르게 생산하는 반응으로 더 많은 항체가 생성된다.
이번 실험에서는 첫 번째 항원 injection후 2주 후에 다시 같은 antigen을 주입하여 3주 후 쥐의 혈액을 채취 하여 항체의 농도를 측정하였다.
▣ Procedure
KLH (1㎎/㎖) PBS FCA route
1 100㎕ 900㎕ - S.C(피하)
2 100㎕ 900㎕ - I.P (복강)
3 100㎕ 400㎕ 500㎕ S.C
4 100㎕ 400㎕ 500㎕ I.P
1. Injection할 sample 준비
① KLH 1㎎/㎖을 100㎕을 취해 e-tube에서 PBS 900㎕과 섞어10배 희석시킨다.
- 주사기의 바늘을 빼고 sample을 빨아 들인 후 다시 바늘을 꽂고 bubble이 안 생기도록 주사기를 손으로 툭툭 쳐서 공기 방울을 빼낸다.
② KLH 1㎎/㎖을 200㎕을 취해 e-tube에서 PBS 800㎕을 섞어 희석시킨 후 주사기로 500㎕빨아들인 후 FCA 500㎕을 syringe mixer를 통해서 섞는다.
- 각 조당 400㎕만큼 요구되어 두 조당 하나의 syringe mixer를 이용하여 1000㎕ 혼합하였다.
- bubble이 안 생기도록 주사기를 손으로 툭툭 쳐서 공기 방울을 빼낸다.
- 이 주사기를 syringe mixer에 꽂아 syringe mixer에 있는 공기방울을 제거하기 위해서 syringe mixer안을 희석한 KLH로 채운 다음 FCA 500㎕이 들어 있는 주사기를 반대편 syringe mixer에 꽂는다.
- FCA는 유화시키는 역할을 하기 때문에 섞는 과정에서 양이 줄어 들 수 있기 때문에 FCA를 500㎕보다 약간 더 많이 넣는다.
- syringe mixer양쪽에 있는 주사기의 cylinder를 번갈아 가며 밀어 주입하는 것을 1000회 정도 반복하여 KLH, FCA, PBS가 잘 섞이도록 한다. (양 쪽 주사기의 cylinder를 밀었을 경우에 주사기와 syringe mixer 접합부가 터질 위험이 있기 때문에 양 손의 힘 조절을 잘 하여야 한다.)
- 섞이는 과정에서 뻑뻑해 불투명한 색으로 변하는데 계속 섞어 주면 부드러워 지다가 다시 뻑뻑해 지는데 이 단계에서
