분야
docx-Reagents
-Apparatus
-Procedure
-Observations & Results
-Discussion
2. HPLC
-Reagents
-Apparatus
-Procedure
-Observations & Results
-Discussion
3. Summary
4. Reference
Subject TLC & HPLC
Principle
TLC
원리
얇은막 크로마토그래피(Thin Layer Chromatography, TLC)는 거름종이 대신 유리판 또는 플라스틱 판상에 실리카겔, 셀루로오스 분말, 산화 알루미늄 등의 흡착제를 얇고(0.25~0.5mm) 균일하게 펼친 후 고정상으로 사용한다. 종이 크로마토그래피에 비해 훨씬 빠른 시간(20분~1시간) 내에 결과를 얻을 수 있고 전개가 효과적이기 때문이다. 또한 그 반점에는 물질이 많은 양으로 농축되어 있기 때문에 상당히 작은 농도의 화합물가지고 효과적으로 검출할 수 있다. TLC 지지체는 매우 안정하기 때문에 열이나 진한 무기산에도 잘 견딜 수 있다. 지지체에 형광 색소와 같은 것을 미리 섞어 두면 반점을 확인하기 훨씬 쉽다.
시료에 따라서 적당한 지지체를 골라 쓸 수도 있기 때문에 이용범위가 넓다. 분리 된 후에 성분을 검출하는 방법이 알려져 있기 때문에 쉽게 성분에 대해 알 수 있고 회수하기도 쉽다. 이온 교환성을 지닌 물질을 지지체로 사용하기도 한다. 분리되는 물질의 상대적 위치의 비율(Rf)의 재현성이 다른 것들보다 약간 떨어지고 크로마토그램의 보존이 어렵다는 단점을 가지고 있다.
Silica gel
가장 흔하게 사용하는 고정상으로, silica(SiO2)는 약산성이며 극성을 띤다. 이 극성에 따라서 용매의 강도가 달라지기 때문에 광범위한 혼합물을 효과적으로 분리할 수 있다. 이동상으로 극성이 낮은 용매를 사용해서 흘려 보내면 극성을 강하게 띠는 시료 성분은 고정상인 silica의 입자의 표면에 있는 -OH기와 결합을 하고 극성이 낮은 시료 성분은 먼저 떨어진다. 따라서 silica gel이 극성을 띠는 성질을 이용해서 시료를 분리할 수 있다.
Rf
용질 이동률(Rate of Flow)의 약자로, 크로마토그래피에서 용질의 특징을 나타내는 지표이다. 혼합된 시료의 각 성분은 물질의 종류, 용매의 종류, 흡착제에 따라서 각각의 독자적인 위치로 이동하는데 이 때의 이동률을 측정함으로써 그 물질이 무엇인지 판별할 수 있다.
Rf=(시료가 이동한 거리)/(용매가 이동한 거리)
예를 들어, 어떤 용매가 10cm 이동할 때, 시료 A는 2cm를 이동했고, 시료 B는 7cm를 이동했다. 그렇다면 용매가 30cm 이동할 때에는 시료 A는 6cm, 시료 B는 21cm를 이동할 것이라고 예측할 수 있다. 이 때의 시료 A는 Rf=0.2이고 시료 B는 Rf=0.7이다. 이렇게 Rf value를 알면 시료 A와 B가 섞여 있을 때 용매의 이동률과 시료의 이동률을 비교함으로써 그 물질을 알 수 있다. Rf값은 용매의 pH, 전개온도 등에 따라서 달라질 수도 있으므로 주의해야 한다.
Naver 백과사전, 자료검색
Wiki 백과사전
http://hplccourse.com/Silicasurface.php
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=p860918&logNo=90114646300
http://blog.naver.com/lovecat2010?Redirect=Log&logNo=10080977084
