전기영동(agarose gel electrophoresis)에 의한 유전자의 분리
a. Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들로는 DNA의 분자의 크기, Agarose의 농도, DNA 형태에 따라 이동속도가 다르다. 또 전압이 높을수록 전기장의 방향, Ethidium bromide, 전기영동 buffer의 성분과 이온의 강도도 전기영동 속도에 영향을
일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화할 수가 있다.
중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro상에서 특정 부위의 DNA를 105∼108배까지 수시간내에 증폭시킬 수 있으며, 이렇게 증폭된 DNA를 다음과 같이 여러가지 실험에 이용할 수 있고, 실험 결과를 토대로
영동상을 볼 수 있는 것이다. 그러므로 단백질의 분리과정을 확인해 볼 수 있을 뿐만 아니라, 이들 단백질의 이동도가 각 분자량의 대수값에 비례하므로 분자량을 이미 알고 있는 표식단백질과 비교하여 분자량을 산출해 낼 수 있다
즉, 순도와 분자량을 추정하는데 일반적으로 이용되는 전기영동법
실험 목적에 따라 적절한 방법을 선택하여야 한다.
1.1.3. 실험과정은 data 분석까지 하루에 끝낼 수 있어 간단하며, 손상을 단일세포수준에서 정량이 가능하므로 적은 sample의 양으로도 실험이 가능하며 형광염색에 의해 눈으로 직접 확인 할 수 있다는 여러 장점이 있다. Comet assay는 빠른 시간 내에 간편
실험을 해본 결과 우리의 재래식 된장이 가장 발암 억제 효과가 크고 일본의 된장이 가장 낮은 것으로 나타났다.
이 같은 항암 효과의 차이는 된장을 만드는 원료와 제조공정의 차이에서 온다고 볼 수 있다.재래식 된장은 100% 콩으로만 만들지만 공장제품은 콩 이외에 쌀이나 보리 등의 곡물을 혼합하
일반적으로 supercoiled DNA > linear DNA > open circular DNA
d. 전압이 높을수록 이동속도가 빠르다.
e. 전기장의 방향도 이동속도에 영향을 미친다.
f. Ethidium bromide는 DNA 이동속도를 15%정도 감소시킨다.
g. 전기영동 buffer의 성분과 이온강도도 electrophoresis speed에 영향을 미친다.
2) DNA loading buffer
Agarose gel의 well에
산물은 점점 많이 존재하게 되므로 cycle 후반부에는 반응시간을 조금씩 늘려가는 것도 좋은 방법의 하나이며 마지막 cycle 에는 약 10분 정도 시간을 충분히 주어서 효소의 활성이 충분히 발휘되도록 한다.
2. 실험재료 및 실험방법
Materials
‣Lysis buffer
-50mM KCl -10mM Tris (pH 8.3)
-2.5mM MgCl2 -0.45% NP
◎ Reporter Gene
형질전환을 한 후 실험자가 쉽게 자신의 형질전환체를 확인할 수 있게끔 만들어 주는 유전자를 말한다. Reporter Gene 사용하는 목적은 우선 형질전환된 유전자가 발현되었는지의 유무와 두 번째로 어느 정도의 양으로 발현되었는가 알아보기 위한 것이다. Reporter Gene으로 사용되는 것들은 G
1. 개 요
전기영동(electrophoresis)은 전기장의 영향을 받아 하전된 물질들이 유동성 매체내에서 이동하는 것을 말한다. 하전된 성분들로는 단백질과 같은 분자나 세포 또는 하전된 입자들이 있다. 유동성 매체로 액체 또는 기체가 사용되지만 생물학적 시스템에 있어서는 액체를 주로 이용한다. 전기영동
1.Title
-PCR of Co dehydrogenase gene & 16S rDNA sequence
2.Date
-2007년 10월 2일(火), 2007년 10월 4일(木)
3.Object & Introduction
*PCR
PCR(유전자증폭기술)은 '중합 효소 연쇄 반응법'이라고도 하며, 인위적으로 유전자를 증폭하는 방법이다. PCR은 DNA 중합효소를 이용해 DNA단편의 여러 복제본을 한꺼번에 만드는 방법