염기순서만 거듭 복제되는 반응이 된다. 즉, DNA의 원하는 부분을 증폭시키는 반응이다. PCR반응은 주형 DNA, DNA 중합효소, 복제지점을 정하는 프라이머(primer) 그리고 DNA 합성의 재료인 뉴클레오타이드(nucleotide), 이 네 가지 요소를 필요로 한다. PCR의 시작 재료는 증폭할 서열을 지닌 DNA이다. PCR을 할 DNA는
nucleotide.
⑷ Taq polymerase : 유전자 합성효소. 효소이지만 열에 강하다.
5. PCR반응 각 성분에 대해 고려할 점
⑴ Template DNA
선택하여 증폭하고자 하는 target DNA 단편을 가리키는 용어로서 세포내의 chromosomal DNA나 전염성 병원체의 DNA 또는 RNA로부터 제조한 complementary DNA(cDNA), plasmid DNA 등을 쓸 수 있다.
primer가 서로 상보적인 염기 결합이 일어나지 않도록 하고 가능하면 반응산물 내에 있는 DNA염기서열을 분석하여 비특이 DNA가 생성되지 않도록 고안해야 한다. Primer의 디자인이 PCR반응의 성공유무의 90%를 차지한다고 할 수 있기 때문에 합성하기 전에 신중히 고려해야 할 것이다.
dNTP(deoxynucleot
유전자를 얻기 힘들고 진핵 생물의 경우, 비발현부위(인트론; Intron)가 같이 나오는 등 여러 가지 문제점이 있다. 그것을 해결하기 위해 특정 유전자에 시발체를 붙인 다음, PCR을 DNA수준이 아닌 RNA나 단백질 수준에서 하는 역전사-PCR 즉 RT(Reverse Transcriptase)-PCR이 있다.
Ⅱ. 실험재료 및 방법 (Materials and Me
DNA의 원하는 부분을 증폭시키는 것이 PCR 의 원리이다.
4. 전기영동
겔 전기 영동법(gel electrophoresis)은 겔 매트릭스에 전류를 흘려보내 DNA, RNA, 단백질 등을 분리하는 실험방법이다.
(1) 겔 전기 영동 장치의 원리
그림과 같이 한천으로 된 겔에 시료를 넣고 전류를 흘려보낸다. 수소 이온 농