DNA 추출하는 모든 과정은 세포질 함유물을 용액으로부터 유리시켜야 한다. 동물이나 식물의 시료는 과정에 들어가기 전에 아주 작은 절편으로 갈아야 한다. 견고한 세포벽을 가지고 있기 때문에 믹서기와 같은 기계로 세포를 파괴하거나, 세포벽 구성성분을 소화할 수 있는 특정 소화효소를 첨가한다.
DNA조각들이 공유결합으로 연결되어 구성된 DNA 분자를 recombinant DNA(재조합DNA)라고 한다.
4. 재조합DNA를 시험관으로 이동: DNA 복제를 위한 효소 장치를 제공하는 숙주세포로 이동시킨다.
5. 재조합DNA가 들어 있는 숙주세포를 선택 또는 확인: 항생제 내성을 이용해서 원하는 유전자를 선별한다.
Ι. DNA
DNA 전기영동 결과를 분석하여 확인할 수 있다. 그리고 Agarose gel로부터 DNA band를 추출하여 DNA를 추출한다.
Principal:
1) Restriction enzyme
제한효소란, DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 2중 사슬을 절단하는 endonuclease(핵산분해효소의 하나)를 뜻한다. 제한효소는 유전공학에서 재조합DNA를 만들
5. 제한효소
1973년 A. chang과 S. Cohen에 의해 최초로 유전자 클로닝 실험이 수행된 이래 대부분의 유전자 클로닝 실험에는 제한효소 (restriction endonuclease)라 불리는 특정한 endonuclease를 사용해 왔다. Endonuclease는 DNA를 무작위적으로 자르나, 현재 100종 이상이 발견된 제한효소는 제한 부위라 부르는 특정 염
효소를 처리하는 실험을 했다.
- 제한효소란 DNA의 특정한 염기서열을 인식하고 인식부위 또는 그 근처의 특정 이중사슬을 절단하는 대표적인 endonuclease로서 재조합DNA를 만들기 위해 사용된다. 이중사슬의 절단은 nucleotide간의 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미한다. 제한효소는 그 특성에 따라 typ