primer, dNTP, polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장 영향을 미치는 것은 primer와 temperature이다.
PCR의 가장 중요한 요소이며, 그것의 정확도를 결정한다. Primer의 길이는 너무 길어도 안되며 너무 짤아도 안된다. 너무 짧다면, 인간의 genome처럼 많은 양의 nucleotide로 구성 된 DNA mole
primer를 합성하고 내열성 DNA polymerase(Taq polymerase)와 thermocycler를 이용해 PCR반응에 따른 특정 유전자 영역의 증폭을 실시한다. 이론적으로는 반응 사이클의 2ⁿ으로 증폭이 가능하다. 증폭이 끝난 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화할 수 있다. PCR을
Sanger sequencing (=chain terminator sequencing)
Sanger sequencing에서 사용하는 ddNTP. 이것은 3‘-OH가 없기 때문에 dNTP자리에 삽입될 경우 그 이후의 DNA elongation이 일어나지 않게 된다.
Sanger method의 sequencing 원리
Sanger method - dNTP뿐 아니라 ddNTP를 사용해 PCR을 수행한 후 다양한 길이의 PCR products의 3‘ nucleotide를 확인
. 이때 사용된 primer 1은 VEGER(Vascular endothelial growth factor)로 혈관내피성장촉진인자이다. 여기서 추론할 수 있듯이 HUVEC cell과 VEGER(Vascular endothelial growth factor)은 혈관내피세포와 관련이 있으므로 template와 관련있는 primer 일 것이며 이에 따라 RT-PCR 반응을 일으킬 것이다. 하지만 primer2는 α-SMA(smooth muscle acti
Primer Extension
3.3.1. 당뇨병 진단에 활용
아디포넥틴의 기능 감소가 인슐린 저항성 및 제2형 당뇨병과 연관되어 있음이 밝혀지고 있는데 당뇨병 환자가 혈중 아디포넥틴의 감소에 의해 매개되었음을 확인할 시 활용가능하다. [5]
3.3.2. 아스피린 과민성 천식에서의 활용
아스피린 과민성 천식은 성인 천