◎분리의종류
1.밀도차에 의한 혼합물의 분리
*분리의 원리
서로 섞이지 않는 두 액체의 밀도가 다른 경우에는 그 차를 이용하여 액체 혼합물을 분리할 수 있다.
(1) 두 액체 혼합물을 시험관에 넣고 가만히 두면 밀도의 차 때문에 밀도가 큰 액체는 아래
층, 밀도가 작은 액체는 위층을 이루게 되
Alkaline lysis method
- 세포의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 방법
- Chromosomal DNA 와 plasmid의 고유한 형태 구조 차이를 이용 !
; Chromosomal DNA - 상대적으로 size가 크고, double heilx
Plasmid - size가 작고, supercoiled 형태 -> pH에 변화에 의한 변성↓
Alkaline Lysis Method
DNA gel electrophoresis(전기영동)
- DN
• 실험 준비물 : Ligation 혼합액, Competent cell, LB 용액, 42℃ water bath, Shaking
incubator, LB agar plate (Amp 50μg/ml – final conc)
실험에 사용할 competent cell을 얼음에서 약 15~20분 동안 녹인다.
Competent cell 200 ul를 각각의 DNA 혼합액에 넣어준 후 얼음에 약 30분간 incubation.
혼합액 tube를
material into eukaryotic cells using a virus vector or other means of transfer. The term transfection for non-viral methods is most often used in reference to mammalian cells, while the term transformation is preferred to describe non-viral DNA transfer in bacteria and non-animal eukaryotic cells such as fungi, algae and plants.
Retrieved from "http://en.wikipedia.org/wiki/transfection"
DNA의 이중 나선
DNA를 물리적으로 연구한 많은 연구자들은 DNA분자를 고도로 질서정연한 구조를 가지고 있는 긴 사슬이라고 주장하였다. 그 당시 가장 중요한 연구방법상의 기술은 X선 회절 분석법이었는데 이 방법에 의하여 DNA 분자의 여러 부분의 배열상태와 크기에 대한 정보를 얻었다. X선 회절실험
DNA 복합체로 대체하는 방법도 고려되고 있다. 최근에는 운반체에 의존하지 않고 순수한 DNA(Naked DNA)를 인체에 직접 투여하는 방법도 개발되었다.
3. 유전자 치료의 방법
유전자 치료는 기본적으로 유전자 전달체 (Vector:벡터)를 이용하여 치료유전자를 특정 위치에 정확하게 전달하고 그 유전자가 발현
3. Definition (1) DNA: deoxyribonucleic acid, basic unit of gene consisting of A, C, G, T생명체가 살아가는데 필요한 유전정보를 저장 (2) RNA: ribonucleic acid, consisting of A, C, G, U mRNA: 유전정보를 전달 (3) gDNA: genomic DNA, genome 전체가 지니고 있는 DNA (4) cDNA: complementary DNA, mRNA로부터 역전사반응에 의해 제조된 DNA ∴ exon은 가지지
도서관을 만들고, 이들 중에서 원하는 유전자를 지닌 클론을 선별한다. 이 클론에는 복제된 유전자가 다량 존재하게 된다.
만약 외래 유전자가 선택적 유전지표를 갖고 있거나 혹은 원하는 유전자를 포함한 DNA 절편만을 골라서 실험한다면 형질전환과 함께 직접 클론을 선발하는 것이 가능하다
DNA를 분리하고자 할 때에는 여전히 옛 방법을 쓰는 것이 좋다.
2) PlasmidDNA 분리
PlasmidDNA의 분리 PlasmidDNA란 염색체 밖에 존재하는 DNA(extrachromosomal small circular DNA)이다. PlasmidDNA는 그 자체내에 replication origin을 가지고 있어서 박테리아 내에서 염색체 DNA 복제와 상관없이 독자적으로 복제되는 특징이
DNA 부분을 증폭시키는 것이 중합효소 연쇄반응의 원리이다.
PCR의 전 과정▶
◭Material
Template DNA
선택하여 증폭하고자 하는 target DNA 단편을 가리키는 용어로서 세포내의 chromosomal DNA나 전염성 병원체의 DNA 또는 RNA로부터 제조한 complementary DNA(cDNA), plasmidDNA 등을 쓸 수 있다.