DNA sub-cloning의 1단계: 원하는 유전자를 분리한다.
실험날짜 : 2011.10.24-28
실험목표 : DNA의 ligation/insertion process를 보고 그 결과를 확인한다. pET-14b vector에 antibiotic resistant 한 gene을 ligation 시키고, 후에 그 DNA를 component cell에 다시 삽입하여 ampicillin을 통해서 제대로 target gene이 삽입되었는지를 관찰하는 것
Clone = identical
Ex) Cell clone
Bacterial clone
Human clone
Gene clone
Gene Cloning
동일한 유전자의 집합을
만드는 과정
유전자 연구를 위해 다량의
동일한 유전자 필요
Reason detail......
가장 중요하고 모든 실험의 기본
모든 고급 테크닉의 시발점
재조합 DNA, 기본적인 효소 처리
2재조합 DNA
(Ge
clone을 선택한다
Plasmid DNA 분리
Restriction enzyme mapping
DNA sequencing
Gene cloning의 결과
1.원하는 유전자를 얻어낸다
유전자는 mRNA에서 얻을 수도 DNA에서 얻을 수도 있다. 이때 RNA는 각 장기마다 발현하는 정도가 다르므로 반드시 내가 원하는 유전자가 많이 발현하는 곳에서 유전자를 얻어야 한다. 그리
1. Cloning의 정의
․ Clone ; identical하다.
ex) Cell clone은 identical한 cell의 집합
Bacterial clone은 같은 형질의 세균들 집합
Human clone은 복제인간
Gene clone은 동일한 유전자의 집합
위의 그림에서와 같이 한 cell에서 배양하여 가득 채운 cell들은 모두 identical하다는 전제하에 실험을 하게 된
Subject : DNA sub-cloning을 위해 원하는 유전자를 분리한다.
Purpose: DNA sub-cloning에 사용할 원하는 유전자를 만들기 위해 plasmid(vector)내에 restriction enzyme을 사용하여 DNA를 자르고 원하는 유전자를 삽입한 후, 목적하는 유전자가 정확하게 cloning되었는지 DNA 전기영동 결과를 분석하여 확인할 수 있
HGU
◇ Date: 20000. 00. 00 월요일
◇ Subject : DNA sub-cloning 1단계
◇ Principles
Plasmid: Bacterial cell 내에 염색체와는 독립적으로 존재하며 독자적으로 증식할 수 있는 Circular DNA로 세균의 생존에 필수적인 것은 아니다. Plasmid는 대부분 하나 이상의 유전자를 가지고, 이들 유전자는 종종 Host bacteria에 의해 나
◈ Observation & Result
Ligased plasmid + 만든 CP Cell
Ligation + 상용 CP cell
Inserted plasmid + 상용 CP Cell
Plasmid only + 상용 CP cell
실험5 Subject Transformant 확인/ LB Broth에 (containing 100μg/ml of ampicillin) transformant를 multiplication
◈ Purpose
전날 만든 transformant가 제대로 배양되었는지 colony를 확인하고, ampicillin을 처리해
To clone phones:
$20-30 for ones produced before 2005
$50-60 for ones produced after 2005
Difference due to A-key
*A-key: a key used to authenticate
the use of a mobile from telecom companies
A-key is checked when calls are made
between a mobile and its telecom co. to detect cloned mobiles. Introduced between 2005 and 2006
1) A-key does not get copied along with ESN
2) A-key chan
1. 정확한 위치에서의 DNA 절단: 염기서열에 특이적인 restriction endonucleases는 클로닝에 필수적인 분자 가위 역할을 한다
2. 자기 자신을 복제할 수 있는 작은 DNA 분자를 선택: 이러한 DNA를 cloning vector라고 한다. Vector는 운반체이며 전형적으로 플라스미드 또는 바이러스의 DNA가 있다.
3. 두 DNA 조각을 공유
1. 복제란?
복제(Cloning)라는 단어는 생물학 연구에서 다양한 의미로 사용되나 가장 간단하고 엄격한 의미로 말하면 분자, 세포, 식물, 동물, 인간의 유전적으로 완벽하게 동일한 존재를 만드는 것을 말한다. 이런 복제 기술은 매우 오랫동안 농업의 한 분야의 기술로 사용되어왔고 현재는 근대 생물학