1. DNA를 자른다는 것은 nucleotide를 연결하고 있는 phosphodiester bond를 끊어여러 DNA 단편을 만들어 내는 것을 의미한다. 이 때, 이런 역할을 하는 효소를nuclease라고 하며 그 종류로는 바깥 쪽을 절단하는 효소인 exonuclease와 안쪽을 절단하는 endonuclease가 있다.
2. 대표적 endonuclease인 제한효소(restriction enzyme)는
band가 어떤 물질을 가지고 있는지를 확인할 수 있다.
① Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
a. DNA분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
b. Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.
c. DNA형태(구조)에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA가 가장 빨리, 그 다음 linear D
Introduction
어떤 생물의 특정한 유전자를 제한효소를 이용하여 잘라서 이 DNA 조각을 세균세포내에 도입하여도 그 유전정보는 발현될 수 없다. 이는 도입된 DNA 단편이 세균세포내의 효소에 의해 분해되거나 그렇지 않으면 세균의 분열과 함께 증식하지 않고 희석되어 소실되기 때문이다.
그러므로
bandligation), EPO 고려
빈혈의 경우에는 EPO를 피하주사로 주어 Hb 11~12g/dL를 목표로 한다. EPO에 의해 적혈구 생성이 활발해 지면 iron이 많이 필요하므로 iron store에도 신경을 쓴다
active한 GI bleeding은 또 출혈할 가능성이 있으므로 심한 출혈이 있어 투석의 적응증이 되면 투석을 하거나 desmopressin등을 써
DNA sub-cloning의 1단계: 원하는 유전자를 분리한다.
실험날짜 : 2011.10.24-28
실험목표 : DNA의 ligation/insertion process를 보고 그 결과를 확인한다. pET-14b vector에 antibiotic resistant 한 gene을 ligation 시키고, 후에 그 DNA를 component cell에 다시 삽입하여 ampicillin을 통해서 제대로 target gene이 삽입되었는지를 관찰하는 것
band를 추출하여 DNA를 추출한다.
Principal:
1) Restriction enzyme
제한효소란, DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 2중 사슬을 절단하는 endonuclease(핵산분해효소의 하나)를 뜻한다. 제한효소는 유전공학에서 재조합 DNA를 만들기 위해서 사용하는 특수한 효소로 알려져 있는데, 여기서 말하는 ‘제한
1. 실험 제목
Gel Extraction
2. 실험 날짜
10/3
3. 실험 목적
저번 실험에서 전기영동한 Gel로부터 원하는 DNA를 추출하기 위해 Gel Purification kit을 이용하여 DNA를 정제한다.
4. 실험 이론
4.1) 전기영동
전기영동이란 전기장 내에서 용액 속의 하전 된 물질들이 반대 전하의 전극을 향해 이동하는 현상을
Alkaline lysis method
- 세포의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 방법
- Chromosomal DNA 와 plasmid의 고유한 형태 구조 차이를 이용 !
; Chromosomal DNA - 상대적으로 size가 크고, double heilx
Plasmid - size가 작고, supercoiled 형태 -> pH에 변화에 의한 변성↓
Alkaline Lysis Method
DNA gel electrophoresis(전기영동)
- DN